Yang baikmikroskopharus mempunyai tiga ciri:
Resolusi Baik: Keupayaan resolusi merujuk kepada keupayaan untuk menghasilkan imej berasingan bagi objek yang diletakkan rapat supaya ia boleh dibezakan sebagai dua entiti yang berasingan. Resolusi:
Lebih kurang 0.2 mm (200μm) pada mata kasar
Mikroskop optik ialah kira-kira 0.2μm
Mikroskopi elektron adalah kira-kira 0.5 nm
. Resolusi bergantung pada indeks biasan. Minyak mempunyai indeks biasan yang lebih tinggi daripada udara.
Kontras yang baik: boleh dipertingkatkan lagi dengan mengotorkan sampel.
Pembesaran yang baik: Ini dicapai dengan menggunakan kanta cekung.
Brightfield atau mikroskop cahaya
Brightfield atau mikroskop cahaya menghasilkan imej gelap dengan latar belakang yang lebih terang.
mikroskop medan gelap
Prinsip: Dalam mikroskop medan gelap, objek kelihatan terang dengan latar belakang gelap. Ini boleh dicapai dengan menggunakan pemeluwap medan gelap khas.
Aplikasi: Digunakan untuk mengenal pasti sel yang berdaya maju, tidak ternoda dan bakteria nipis seperti Spirochaetes yang tidak boleh diperhatikan oleh mikroskop cahaya.
mikroskop kontras fasa
Ia menggambarkan sel hidup dengan mencipta perbezaan kontras antara sel dan air. Ia menukarkan perbezaan halus dalam indeks biasan dan ketumpatan sel kepada perubahan yang mudah dikesan dalam keamatan cahaya.
Berguna untuk belajar:
pergerakan mikrob
Tentukan bentuk sel hidup
Mengesan komponen bakteria seperti endospora dan badan kemasukan.
Mikroskop pendarfluor
Cara ia berfungsi: Apabila pewarna pendarfluor terdedah kepada cahaya ultraungu (UV), ia teruja dan pendarfluor, iaitu ia menukarkan sinaran gelombang pendek yang tidak kelihatan ini kepada cahaya panjang gelombang yang lebih panjang (cahaya kelihatan).
Aplikasi: Mikroskopi epifluoresensi mempunyai aplikasi berikut:
Autofluores apabila diletakkan di bawah cahaya UV, seperti siklosporin
Mikroorganisma yang disalut dengan pewarna pendarfluor, seperti oren atriol untuk parasit malaria (QBC) dan aurinol untuk Mycobacterium tuberculosis.
Immunofluoresensi: Ia menggunakan antibodi yang dilabelkan dengan pewarna pendarfluor untuk mengesan antigen permukaan sel atau antibodi yang mengikat antigen permukaan sel. Terdapat tiga jenis: JIKA langsung, JIKA tidak langsung, dan sitometri aliran.
mikroskop elektron
Ia telah dicipta oleh Ernst Ruska pada tahun 1931. Ia berbeza daripada mikroskop cahaya dengan cara yang berbeza.
Terdapat dua jenis EM:
EM penghantaran (jenis MC, meneliti struktur dalaman, resolusi 0.5 nm, memberikan pandangan dua dimensi)
Mengimbas EM (memeriksa permukaan dengan resolusi 7 nm, memberikan pandangan 3D)
Prinsip mikroskop elektron penghantaran
Penyediaan Sampel: Lakukan langkah berikut pada sel untuk menyediakan sampel yang sangat nipis (20 hingga 100 nm tebal)
Penetapan: Betulkan sel menggunakan glutaraldehid atau tetroksida untuk menstabilkannya.
Dehidrasi: Sampel kemudiannya dehidrasi menggunakan pelarut organik seperti aseton atau etanol.
Pembenaman: Spesimen dibenamkan dalam polimer plastik, yang kemudiannya mengeras untuk membentuk jisim pepejal. Kebanyakan polimer plastik tidak larut dalam air. Oleh itu, sampel mesti dikeringkan sepenuhnya sebelum dibenamkan.
Pembahagian: Spesimen kemudian dipotong menjadi bahagian nipis dengan ultramikrotome dan bahagian itu dipasang pada slaid logam (kuprum).
Teknik beku-etching: Ini adalah kaedah alternatif untuk menggambarkan organel di dalam sel untuk penyediaan spesimen.
Sel-sel cepat beku, kemudian dipanaskan → pecah menggunakan pisau untuk mendedahkan organel dalaman → disublimasikan → ditutup dengan salutan platinum dan karbon.
Langkah-langkah untuk meningkatkan kontras EM termasuk:
Pewarnaan dengan larutan garam logam berat seperti plumbum sitrat dan uranil asetat
Pewarnaan negatif dengan logam berat seperti asid fosfotungstik atau uranil asetat.
Lorekan: Spesimen disalut dengan filem nipis platinum atau logam berat lain pada sudut 45 darjah supaya logam itu terkena mikroorganisma pada satu sisi sahaja.
