Kebanyakan komponen selular tidak berwarna dan tidak dapat dibezakan dengan jelas di bawah mikroskop. Premis asas mikroskop pendarfluor ialah pewarnaan komponen dengan pewarna.
Pewarna pendarfluor, juga dikenali sebagai pendarfluor atau pewarna pendarfluor, ialah molekul yang menyerap cahaya pengujaan pada panjang gelombang tertentu (biasanya UV) dan memancarkan cahaya dengan panjang gelombang yang lebih panjang selepas kelewatan yang singkat. Kelewatan antara penyerapan dan pelepasan boleh diabaikan, biasanya mengikut urutan nanosaat.
Cahaya yang dipancarkan kemudiannya boleh ditapis daripada cahaya pengujaan untuk mendedahkan lokasi fluorophore.
Mikroskopi pendarfluor menggunakan cahaya yang lebih terang untuk menerangi sampel. Cahaya ini merangsang bahan pendarfluor dalam sampel, yang kemudiannya memancarkan cahaya pada panjang gelombang yang lebih panjang.
Imej yang terhasil adalah berdasarkan panjang gelombang pancaran sumber cahaya kedua atau bahan pendarfluor selain daripada cahaya yang asalnya digunakan untuk menerangi dan mengujakan sampel.
pemprosesan
Cahaya pada panjang gelombang pengujaan difokuskan pada sampel melalui kanta objektif. Pendarfluor yang dipancarkan oleh sampel difokuskan pada pengesan melalui kanta objektif. Oleh kerana kebanyakan cahaya pengujaan dihantar melalui sampel, hanya cahaya pengujaan yang dipantulkan mencapai objektif bersama-sama dengan cahaya yang dipancarkan.
bentuk
"Mikroskop pendarfluor" merujuk kepada mana-mana mikroskop yang menggunakan pendarfluor untuk menghasilkan imej, sama ada peranti yang lebih ringkas seperti mikroskop pendarfluor epi, atau reka bentuk yang lebih kompleks seperti mikroskop confocal, yang menggunakan keratan optik untuk mendapatkan resolusi yang lebih baik. Imej pendarfluor.
Kebanyakan mikroskop pendarfluor yang digunakan ialah mikroskop epifluoresensi, di mana pengujaan fluorofor dan pengesanan pendarfluor dicapai melalui laluan optik yang sama (iaitu, melalui kanta objektif).
